ELISA中試劑:ELISA常用酶辣根過(guò)氧化酶(HRP)

　　ELISA中試劑:ELISA常用酶辣根過(guò)氧化酶(HRP)

　　ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))中，辣根過(guò)氧化酶(HRP)是常用的標(biāo)記酶之一，因其的性質(zhì)和廣泛的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)而備受青睞。以下是關(guān)于HRP在ELISA中的主要特點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)勢(shì)：

　　1. ?HRP的基本特性?

　　分子結(jié)構(gòu)?：HRP是一種糖蛋白，由無(wú)色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉輔基組成，分子量約為40 kDa?。

　　吸收特性?：HRP在403 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，而去輔基的酶蛋白在275 nm波長(zhǎng)處有最大吸收?。

　　純度與活性?：HRP的純度用RZ值表示，但RZ值僅反映血紅素基團(tuán)的含量，與酶活性無(wú)關(guān)。酶活性以單位(U)表示，即1分鐘內(nèi)將1 μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量?。

　　2. ?HRP的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)?

　　穩(wěn)定性高?：HRP對(duì)熱和有機(jī)溶劑較為穩(wěn)定，易于保存和使用?。

　　價(jià)格低廉?：與堿性磷酸酶(AP)相比，HRP價(jià)格更低，且易于獲得高純度制劑?。

　　標(biāo)記效率高?：HRP在酶標(biāo)記物制備中得率較高，適合大規(guī)模應(yīng)用?。

　　底物多樣性?：HRP可催化多種底物，如四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、鄰苯二胺(OPD)等，顯色反應(yīng)靈敏且穩(wěn)定?。

　　3. ?HRP在ELISA中的具體應(yīng)用?

　　檢測(cè)流程?：HRP通常作為二抗的標(biāo)記酶，通過(guò)催化底物顯色反應(yīng)，將無(wú)色信號(hào)轉(zhuǎn)化為顯色產(chǎn)物，用于量化目標(biāo)抗體水平?。

　　底物選擇?：TMB是目前ELISA中常用的HRP底物，因其穩(wěn)定性好、成色反應(yīng)無(wú)需避光且無(wú)致突變作用?。

　　反應(yīng)終止?：HRP的酶促反應(yīng)可通過(guò)強(qiáng)酸或疊氮鈉等終止劑有效終止?。

　　4. ?HRP的保存與使用?

　　保存條件?：HRP在干燥狀態(tài)下于-20°C可長(zhǎng)期保持穩(wěn)定，冷凍保存時(shí)需使用甘油、磷酸鈉等基質(zhì)溶液以維持其活性?。

　　使用注意事項(xiàng)?：避免使用疊氮鈉作為防腐劑，因其可能抑制HRP活性?。

　　綜上所述，HRP因其高穩(wěn)定性、低成本、高效標(biāo)記和廣泛底物適用性，成為ELISA中常用的標(biāo)記酶之一?。

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