ELISA中試劑:ELISA常用酶辣根過氧化酶(HRP)

　　ELISA中試劑:ELISA常用酶辣根過氧化酶(HRP)

　　ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)中，辣根過氧化酶(HRP)是常用的標記酶之一，因其的性質和廣泛的應用優(yōu)勢而備受青睞。以下是關于HRP在ELISA中的主要特點和應用優(yōu)勢：

　　1. ?HRP的基本特性?

　　分子結構?：HRP是一種糖蛋白，由無色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉輔基組成，分子量約為40 kDa?。

　　吸收特性?：HRP在403 nm波長處有最大吸收峰，而去輔基的酶蛋白在275 nm波長處有最大吸收?。

　　純度與活性?：HRP的純度用RZ值表示，但RZ值僅反映血紅素基團的含量，與酶活性無關。酶活性以單位(U)表示，即1分鐘內(nèi)將1 μmol底物轉化為產(chǎn)物所需的酶量?。

　　2. ?HRP的應用優(yōu)勢?

　　穩(wěn)定性高?：HRP對熱和有機溶劑較為穩(wěn)定，易于保存和使用?。

　　價格低廉?：與堿性磷酸酶(AP)相比，HRP價格更低，且易于獲得高純度制劑?。

　　標記效率高?：HRP在酶標記物制備中得率較高，適合大規(guī)模應用?。

　　底物多樣性?：HRP可催化多種底物，如四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、鄰苯二胺(OPD)等，顯色反應靈敏且穩(wěn)定?。

　　3. ?HRP在ELISA中的具體應用?

　　檢測流程?：HRP通常作為二抗的標記酶，通過催化底物顯色反應，將無色信號轉化為顯色產(chǎn)物，用于量化目標抗體水平?。

　　底物選擇?：TMB是目前ELISA中常用的HRP底物，因其穩(wěn)定性好、成色反應無需避光且無致突變作用?。

　　反應終止?：HRP的酶促反應可通過強酸或疊氮鈉等終止劑有效終止?。

　　4. ?HRP的保存與使用?

　　保存條件?：HRP在干燥狀態(tài)下于-20°C可長期保持穩(wěn)定，冷凍保存時需使用甘油、磷酸鈉等基質溶液以維持其活性?。

　　使用注意事項?：避免使用疊氮鈉作為防腐劑，因其可能抑制HRP活性?。

　　綜上所述，HRP因其高穩(wěn)定性、低成本、高效標記和廣泛底物適用性，成為ELISA中常用的標記酶之一?。

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