如何區(qū)分ELISA已加樣孔和未加樣孔?

　　在ELISA實驗中，準(zhǔn)確區(qū)分已加樣孔和未加樣孔至關(guān)重要，可避免重復(fù)加樣或漏加樣，從而保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。以下是幾種實用的區(qū)分方法：

　　1. 物理標(biāo)記法(推薦)

　　(1) 使用可擦寫板蓋標(biāo)記

　　工具：防水實驗室記號筆(如VWR或Thermo Scientific品牌)或可擦寫標(biāo)簽貼。

　　方法：

　　加樣后立即在板蓋對應(yīng)孔位置畫“?"或標(biāo)注樣本編號。

　　結(jié)束后用酒精棉片擦拭干凈，方便重復(fù)使用。

　　優(yōu)點：直觀、操作快捷，適合手工操作。

　　(2) 孔位布局規(guī)劃

　　模板化加樣：

　　提前設(shè)計加樣順序(如“從左到右，逐行加樣")，并用空白對照孔作為分界標(biāo)記。

　　示例：第1行加標(biāo)準(zhǔn)品，第2行加待測樣本，第3行留空(陰性對照)。

　　2. 可視化輔助法

　　(1) 液體高度觀察

　　適用情況：加樣量≥50 μL時。

　　方法：

　　傾斜微孔板，觀察孔內(nèi)液面反光(已加樣孔可見明顯液面，未加樣孔為干燥狀態(tài))。

　　注意：需在白色背景光下觀察，避免強光直射。

　　(2) 顯色預(yù)判(針對彩色樣本)

　　適用樣本：含血紅蛋白(紅色)、細(xì)胞裂解液(渾濁)等有色樣本。

　　方法：直接通過顏色區(qū)分，但需注意無色樣本(如緩沖液)不適用。

　　3. 技術(shù)輔助法

　　(1) 多通道移液器同步加樣

　　操作：

　　使用8通道或12通道移液器，按行/列一次性加樣(避免單孔遺漏)。

　　加樣后移液器槍頭仍停留在孔中，作為物理標(biāo)記。

　　優(yōu)點：高效且不易出錯，適合高通量實驗。

　　(2) 自動化記錄

　　電子表格跟蹤：

　　提前在Excel中繪制96孔板模板，加樣后實時填寫孔位狀態(tài)。

　　示例：

　　孔位A1  A2  A3...

　　樣本S1  S2  NC...

　　4. 防錯設(shè)計(預(yù)防漏加/重復(fù)加樣)

　　(1) 板架分區(qū)

　　將微孔板放置在標(biāo)有“已加樣"和“未加樣"區(qū)域的板架上，加樣后移動位置。

　　(2) 雙人核對

　　一人加樣，另一人實時核對記錄，尤其適用于臨床樣本檢測。

　　5. 疑難問題解決

　　問題：加樣后液體揮發(fā)，難以辨別是否已加樣。

　　解決：

　　縮短加樣到孵育的時間間隔(如分批加樣)。

　　使用帶密封蓋的微孔板(防止蒸發(fā))。

　　問題：部分孔因氣泡干擾觀察。

　　解決：加樣后離心微孔板(1000 ×g，1分鐘)去除氣泡。

　　總結(jié)

　　方法適用場景注意事項

　　板蓋標(biāo)記法手工操作、少量樣本需使用可擦寫筆

　　液體高度觀察加樣量≥50 μL需良好光線條件

　　多通道移液器同步加樣高通量實驗需校準(zhǔn)移液器通道一致性

　　電子表格記錄復(fù)雜實驗設(shè)計(如多批次樣本)需實時更新記錄

　　推薦策略：

　　常規(guī)實驗：板蓋標(biāo)記 + 多通道移液器。

　　高通量檢測：自動化記錄 + 雙人核對。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，如需完整版產(chǎn)品信息請咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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