如何判斷ELISA實(shí)驗(yàn)中的空白孔是否陽性?

　　以下是ELISA實(shí)驗(yàn)中判斷空白孔陽性的標(biāo)準(zhǔn)及處理流程：

　　一、空白孔陽性判定標(biāo)準(zhǔn)?

　　吸光度(OD值)閾值?

　　空白孔OD值超過陰性對照平均值3倍標(biāo)準(zhǔn)差(3SD)

　　或OD值>0.15(需根據(jù)試劑盒說明書調(diào)整)

　　顏色異常?

　　肉眼觀察空白孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色(未加終止液時(shí))或黃色(已終止)

　　二、空白孔陽性原因分析?

　　試劑污染?

　　酶標(biāo)二抗非特異性結(jié)合(需驗(yàn)證抗體特異性)

　　底物溶液氧化變質(zhì)(顯色液變黃或渾濁)

　　操作誤差?

　　洗滌不導(dǎo)致殘留酶標(biāo)抗體

　　封板膜破損導(dǎo)致塵埃污染

　　三、處理步驟?

　　步驟? ?操作要點(diǎn)?

　　1. 復(fù)測驗(yàn)證? 重新加樣檢測空白孔，若重復(fù)出現(xiàn)陽性則判定系統(tǒng)污染

　　2. 排查污染源? 檢查試劑有效期、更換新批次酶標(biāo)板、驗(yàn)證洗滌流程

　　3. 數(shù)據(jù)修正? 若無法排除污染，需以本批實(shí)驗(yàn)的陰性對照OD值為基線重新計(jì)算樣本結(jié)果

　　注：競爭法ELISA中空白孔陽性需特別關(guān)注標(biāo)準(zhǔn)品梯度是否異常。

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