ELISA試劑盒測定原理有哪些
ELISA試劑盒的測定原理基于抗原-抗體特異性結合和酶催化顯色反應,通過顏色變化實現目標物的定性與定量分析。其核心步驟包括:將抗原或抗體固定于固相載體表面,加入待測樣本后形成免疫復合物,經洗滌后加入酶標記的檢測抗體或抗原,最后通過底物顯色反應測量吸光度值。
一、基本原理
抗原-抗體特異性結合?:目標分子與對應抗體通過生物分子間的互補結構形成穩定復合物,具有高特異性和靈敏度。
酶標記與信號放大?:酶(如辣根過氧化物酶)與抗體或抗原偶聯,加入底物后產生顏色信號,顯色強度與目標物濃度成正比。
定量分析?:通過酶標儀測量吸光度(OD值),結合標準曲線計算目標物濃度。
二、常用檢測模式
直接法?:抗原包被于固相載體,直接加入酶標記的一抗檢測。操作簡便,但需為每種抗原制備特異性酶標一抗,通用性低。
間接法?:一抗與抗原結合,再加入酶標記的二抗檢測。靈敏度高,常用于抗體檢測。
夾心法?:兩個抗體夾抗原形成三明治結構,適用于大分子抗原檢測。
競爭法?:標本中的抗原與酶標抗原競爭結合固相抗體,適用于小分子抗原及半抗原檢測。
注:以上僅供參考,本試劑僅供科研使用,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
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