大鼠白介素12(IL-12P70)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說明書 一、試劑盒組成 預(yù)包被抗體的96孔板(進(jìn)口高親和力抗體) 重組凍干標(biāo)準(zhǔn)品(需按說明書復(fù)溶) 生物素化檢測抗體(避光保存) 鏈霉親和素-HRP復(fù)合物(ABC稀釋液配制) TMB顯色液與終止液(含硫酸) 樣本稀釋液(含穩(wěn)定劑) 洗滌緩沖液(20×濃縮液) 二、檢測原理 采用雙抗體夾心法： 固相抗體捕獲樣本中的IL-12 p70 生物素化抗體結(jié)合目標(biāo)抗原 鏈霉親和素-HRP催化TMB顯色 450nm波長讀值(參考波長540/570nm) 三、操作流程 樣本處理 血清/血漿：避免溶血，4℃短期保存，-80℃長期保存 細(xì)胞上清：離心去除顆粒物，建議新鮮檢測 實(shí)驗(yàn)步驟 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(建議7點(diǎn)濃度) 每孔加樣100μL(標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/空白) 37℃孵育90分鐘 洗滌3次(每次拍干) 加檢測抗體(100μL/孔)，37℃孵育60分鐘 加ABC復(fù)合物(100μL/孔)，避光孵育30分鐘 顯色15分鐘(避光)，加終止液終止反應(yīng) 四、關(guān)鍵參數(shù) 項(xiàng)目參數(shù) 靈敏度7-14.2pg/mL(不同品牌差異) 檢測范圍15.6-1000pg/mL(線性區(qū)間) 重復(fù)性板內(nèi)/板間CV<10% 交叉反應(yīng)不與IL-6、G-CSF等混淆 五、注意事項(xiàng) 所有試劑使用前需平衡至室溫(25℃) 顯色反應(yīng)需嚴(yán)格控制時(shí)間(±30秒) 終止液含腐蝕性成分，需佩戴防護(hù)裝備 建議每次實(shí)驗(yàn)建立新標(biāo)準(zhǔn)曲線 異常值需復(fù)測(建議n=3) 六、結(jié)果計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線 四參數(shù)邏輯回歸擬合 樣本濃度=擬合方程計(jì)算值×稀釋倍數(shù) 七、性能驗(yàn)證 回收率測試：建議加標(biāo)回收率85%-115% 穩(wěn)定性評估：開封后試劑需2-8℃避光保存 注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。 | 
