以下是ELISA樣本制備的關(guān)鍵步驟及注意事項，綜合實驗規(guī)范與常見問題：
一、樣本類型處理要點
血清制備
采集后室溫靜置1小時，4℃ 2500rpm離心10分鐘取上清
避免溶血(血紅素干擾HRP顯色)和細(xì)菌污染(內(nèi)源性酶致假陽性)
血漿處理
使用EDTA抗凝管采集，30分鐘內(nèi)4℃離心分離
肝素抗凝劑可能干擾檢測，需參照試劑盒要求選擇
細(xì)胞培養(yǎng)上清
1500rpm離心10分鐘去除細(xì)胞碎片，分裝后-80℃保存
尿液/腦脊液
10000×g離心2分鐘，去除沉淀物后檢測
二、保存與凍存規(guī)范
樣本類型 短期保存 長期保存 禁忌
血清/血漿 2-8℃ 48小時 -80℃(6個月) 反復(fù)凍融>3次
細(xì)胞上清 4℃ 24小時 -80℃(分裝) 室溫放置>30分鐘
三、關(guān)鍵注意事項
防污染措施
使用無菌離心管，操作全程在冰上進行(除凝血步驟)
細(xì)菌污染樣本需離心后取上清重新檢測
離心參數(shù)控制
血清/血漿：2500-3000rpm，10分鐘
細(xì)胞裂解物：12000-13000rpm，5-10分鐘
特殊樣本處理
高脂血樣本需超速離心(10000×g 15分鐘)
組織樣本需液氮速凍后研磨，避免蛋白降解
四、常見問題解決方案
假陽性高：檢查溶血/脂血情況，更換抗凝劑類型
重復(fù)性差：確保分裝凍存，避免凍融循環(huán)
濃度異常：預(yù)實驗確定樣本稀釋倍數(shù)(建議1:5-1:10)
通過規(guī)范操作可顯著提升檢測準(zhǔn)確性。
注：以上資料僅供參考，不同品牌產(chǎn)品可能存在設(shè)計差異，操作前建議參考說明書。
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