如何處理ELISA實(shí)驗(yàn)中的樣本污染?
在ELISA實(shí)驗(yàn)中處理樣本污染需從樣本采集、處理到檢測(cè)全流程進(jìn)行嚴(yán)格防控，以下是關(guān)鍵措施：
一、樣本采集與保存
避免溶血與細(xì)菌污染
血液樣本采集時(shí)需使用無(wú)抗凝劑或EDTA-Na2抗凝管，避免溶血(血紅蛋白干擾HRP顯色)及細(xì)菌污染(內(nèi)源性酶干擾)。
分裝凍存
樣本需按單次用量分裝，短期保存于2-8℃，長(zhǎng)期保存于-70℃以下，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白降解。
二、樣本處理規(guī)范
特殊樣本預(yù)處理
唾液/尿液：離心去除雜質(zhì)(唾液4000×g離心10分鐘，尿液1000×g離心15分鐘)。
組織樣本：用預(yù)冷PBS勻漿后5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測(cè)。
稀釋與混勻
高濃度樣本需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù)，稀釋后輕柔混勻避免氣泡，劇烈振蕩可能破壞蛋白結(jié)構(gòu)。
三、操作流程控制
分區(qū)操作與耗材管理
設(shè)立樣本制備區(qū)、加樣區(qū)、孵育區(qū)，使用一次性槍頭(每樣本更換)和獨(dú)立移液器，避免交叉污染。
加樣與洗滌
垂直加樣防止飛濺，洗板時(shí)確保洗液注滿孔位，拍板力度適中避免殘留酶標(biāo)物。
四、環(huán)境與儀器維護(hù)
溫育與顯色
孵育溫度穩(wěn)定在37℃，顯色時(shí)間嚴(yán)格按說明書控制，避光操作以減少非特異性顯色。
儀器清潔
定期檢查洗板機(jī)管道是否堵塞，酶標(biāo)儀濾光片需清潔，高滴度樣本檢測(cè)后清潔儀器。
通過上述措施可有效降低ELISA樣本污染風(fēng)險(xiǎn)，確保檢測(cè)準(zhǔn)確性。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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