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      犬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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        犬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒實驗使用說明書

        本生犬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒實驗使用說明書,包含操作流程、注意事項及關鍵參數(shù)說明。

        一、試劑盒組成

        預包被酶標板:96孔/48孔,已包被抗IFN-α抗體

        標準品:凍干粉,需用標準品稀釋液復配(梯度稀釋范圍:15.6-1000 ng/mL)

        檢測抗體:生物素化抗IFN-α抗體(100×濃縮液)

        顯色系統(tǒng):TMB底物A/B液(避光保存)、終止液(2M H?SO?)

        其他:20×濃縮洗滌液、封板膜、說明書

        二、實驗操作流程

        1. 樣本準備

        血清/血漿:采集后離心(3000 rpm, 10 min),避免溶血,2-8℃保存≤48小時,長期保存需-20℃/-80℃(避免反復凍融)

        組織/細胞上清:離心去沉淀,蛋白定量后稀釋至檢測范圍內^^2^^

        2. 洗滌液配置

        按1:19比例用蒸餾水稀釋濃縮洗滌液(如1mL濃縮液+19mL水),現(xiàn)配現(xiàn)用^^1^^2^^

        3. 檢測步驟

        步驟操作要點時間/溫度

        加樣標準品/樣本各100μL/孔,空白孔加稀釋液37℃ 90min

        洗滌甩干后每孔加350μL洗滌液,重復3次,拍干室溫

        加抗體每孔加100μL生物素化抗體(1:100稀釋)37℃ 60min

        加酶標物每孔加100μL SABC復合物37℃ 30min

        顯色每孔加90μL TMB底物(避光)37℃ 15min

        終止每孔加50μL終止液立即讀數(shù)

        三、關鍵注意事項

        安全防護:

        終止液具腐蝕性,需戴手套操作;避免底物B接觸皮膚

        實驗區(qū)禁止飲食,使用一次性吸頭防止交叉污染

        操作規(guī)范:

        加樣順序一致,確保溫育時間誤差≤5分鐘

        顯色后10分鐘內測定OD值(450nm波長)

        數(shù)據(jù)解析:

        標準曲線R2需≥0.99,樣本濃度超出范圍需重新稀釋

        四、常見問題處理

        高背景值:檢查洗滌是否,避免吸水紙殘留液體

        顯色異常:確認TMB底物是否避光保存,終止液是否按比例添加

        標準曲線偏差:復溶標準品時需充分渦旋混勻

        注意:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒 

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